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我公司推出氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血液中乙基葡萄糖醛酸苷
點(diǎn)擊次數(shù):3623 更新時(shí)間:2010-04-19 返回

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

 

 

 

  

 


 

目的建立血液中乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide,EtG)的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)測(cè)定方法。

方法 血液用于乙腈沉淀蛋白,離心后,將上清液轉(zhuǎn)移吹干,殘留物經(jīng)N,O-雙(*基硅烷基)三氟乙酰胺衍生化,用GC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 血液中EtG的檢出限為0.05ul/ml,線性范圍為0.1-10ul/mlr=0.9999)。對(duì)送檢案例血液檢材進(jìn)行EtG檢測(cè),效果良好。

結(jié)論 本方法適用于血液中EtG的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞:法醫(yī)毒理學(xué);血液;乙基葡萄糖醛酸苷;氣相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法

 

酒后駕車是一個(gè)世界性的交通安全問題。我國(guó)每年因交通事故死亡中約25%-30%與酒后駕車有關(guān)。由于乙醇在體內(nèi)代謝較快,一般飲酒后6-8h體內(nèi)已檢測(cè)不到乙醇。對(duì)于疑酒后駕車肇事后逃逸者,在一定時(shí)間后體內(nèi)檢測(cè)不到乙醇,因此需要尋找新的途徑證明肇事者是否為酒后駕車。

乙醇進(jìn)入人體后,有一部分乙醇與尿嘧啶核苷-5-二磷-葡萄糖醛酸結(jié)合成乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronideEtG)由于其比原體乙醇的半衰期長(zhǎng),當(dāng)血液中乙醇濃度低于檢測(cè)*,體內(nèi)仍可在一定時(shí)間內(nèi)檢出EtG。因此血液中EtG的檢測(cè)及評(píng)價(jià)越來越為人們所重視 ,特別是酒后駕車肇事逃逸案件中,抽血與事故發(fā)生時(shí)間隔過長(zhǎng),血液中往往測(cè)不出乙醇成分,但可以檢測(cè)血液中EtG

血液中EtG的測(cè)定方法主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用發(fā)(GC-MS)。LC-MS/MS是zui常用的檢測(cè)方法。GC-MS測(cè)定中雜質(zhì)干擾較多,對(duì)樣品前處理要求較高,需要固相萃取,樣品處理時(shí)間長(zhǎng),而氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)可以克服這些缺點(diǎn)

本研究建立了血液用乙腈沉淀蛋白,經(jīng)衍生化后用GC-MS/MS檢測(cè)EtG的方法

1 材料與方法

   1.1 儀器與試劑

           氣相色譜(美國(guó)Agilent公司)與串聯(lián)質(zhì)譜(美國(guó)Waters公司)聯(lián)用儀,離心機(jī)(美國(guó)Eppendorf公司),EtGEtG-d5美國(guó)Cerilliant公司,N,O-雙(*基硅烷基)三氟乙酰胺-*基氯硅烷(BSTFA-TMCS,體積比為991)(美國(guó)Sigma-Aldrich公司),其余試劑均為分析純。

 

1.2溶液配制

         EtG溶液:將100ug/mlEtG標(biāo)準(zhǔn)甲醇溶液用甲醇稀釋得20.0ug/mlEtG工作液。 內(nèi)標(biāo)EtG-d5工作液。

1.3樣品前處理:

取血液0.10ml置于1.5ml離心管中,加入5ul內(nèi)標(biāo)EtG-d5工作液和0.90ml腈,渦旋混合,以離子半徑6cm10000r/min,離心5min,轉(zhuǎn)移上清液另一離心管中,6cm,10000r/min,離心5min,轉(zhuǎn)移上清液另一離心管中,60℃水浴中空氣流下吹干,殘留物中加入BSTFA-TMCS(66ul)和吡啶(33ul),90℃干燥箱中進(jìn)行衍生化反應(yīng)30min,取出。冷卻后1ul進(jìn)樣。

1.4儀器分析:

1.4.1氣相色譜柱條件

         色譜柱:HP-1MS毛細(xì)管柱(30mX0.25mm,0.1um)。柱溫:初溫100℃保持1min,以8/min程序升溫205℃,再以30/min程序升溫280℃保持3min。進(jìn)樣口溫度: 250℃。分流比為101.載氣:氦氣,流速為1ml/min。

1.4.2質(zhì)譜條件

離子源(EI源)溫度220℃,接口溫度300℃,碰撞氣為氬氣。正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè),MRM定性離子對(duì):EtG 261>143(CE=5),261>73(CE=20);EtG-d5266>143(CE=5),266>73(CE=20);261>143(EtG)266>143(EtG-d5作為定量離子對(duì)。

2  案例應(yīng)用

   某司機(jī)于某日上午700許發(fā)生交通事故后,駕車逃離現(xiàn)場(chǎng),當(dāng)日晚2100許投案。靜脈抽血送檢,其時(shí)距交通肇事時(shí)間為14h,結(jié)果未檢出乙醇成分。應(yīng)用本方法分析,結(jié)果檢出EtG成分,為委托單位辦案提供了有力的證據(jù)。

3   結(jié)論

        本方法建立了一種有機(jī)溶劑沉淀蛋白,經(jīng)衍生化后,用GC-MS/MS檢測(cè)血液中EtG的方法,并成功應(yīng)用于案例。該方法簡(jiǎn)便、快速,適用于實(shí)際檢案工作。

 

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